단클론 항체는 우리의 시설에 많은 다른 세포주에서 생성할 수 있습니다. 그러나 우리는 중국 햄스터 난소(조)또는 인간 배아 신장(헥)세포주는 견고한 성장과 단일 클론 항체의 단일 클론 도메인에서 인간과 유사한 글리코 실화를 수행 할 수있는 능력으로 인해 선호됩니다.
단클론 항체 생산을 위한 최적화된 워크플로우 및 타임라인은 다음과 같이 상세하게 설명될 수 있습니다:
- 서열이 아직 이용 가능하지 않은 경우의 항체 서열(가변 영역 및 리더 서열의 경우 2-3 주; 전체 길이 서열의 경우 3-4 주)
- 정제 된 단백질(질량 스펙트럼 기반 시퀀싱)
- 하이브리도마 세포주(전사체 기반 시퀀싱)
- 적절한 발현 벡터의 선택,유전자 합성 및 항체 인코딩 유전자의 복제-2-3 주에 시작
- 형질감염
- 단기 프로젝트 또는 중소 규모 생산을위한 일시적인 발현(3-4 주에 시작)
- 장기 프로젝트를위한 안정적인 세포주 생성,상업 및 대규모 생산(5 개월에 시작)
- 생산 스케일 업 및 정화(리드 타임은 수량에 따라 다름)
단일 클론항체의 일시적인 표현은 대부분의 신청을 위해 충분합니다. 이 경우 필요한 수율 및 순도 수준에 따라 형질 감염,생산,정제 단계(위에 설명 된 공정의 4 단계 및 5 단계)는 3~4 주에 시작됩니다. 일시적인 발현에 의해 생성 된 단일 클론 항체는 예비 특성화 연구,연구 프로젝트 및 전임상 테스트에 사용됩니다.
대조적으로,항체가 치료적 응용을 위해 의도되거나 체외 진단 및 의료 기기의 성분으로 사용될 경우,안정한 세포주가 생성되어야 한다. 이 경우 형질 감염,스크리닝 및 서브 클로닝은 5-6 개월에 시작됩니다. 안정적인 셀 라인 생성 프로세스의 주요 과제는 단일 클론 선택 및 안정성 확인의 노동 집약적이고 시간이 많이 걸리는 프로세스에서 파생됩니다.
상세히,벡터의 형질감염 시,안정한 풀(여러 클론의 혼합물)이 얻어지고 증폭된다. 이러한 풀의 예비 특성화를 통해 연구원은 가장 높고 가장 일관된 생산 수율을 가진 풀을 식별 할 수 있습니다. 그 후,생산성이 높은 풀이 모노 클론 격리를 위해 선택됩니다. 단일 클론은 단일 세포에서 유래 한 특정 하위 집단으로 정의되므로 단일 클론은 안정적으로 통합 된 벡터 및 유사한 생산 수율과 동일한 유전 적 배경을 공유합니다.
단일 세포 분리의 어려움으로 인해 포유류 세포주로 작업 할 때”클론 성”을 보장하는 것은 특히 어려울 수 있습니다. 현재 프로테오제닉스에서의 모노 클론 격리는 두 가지 주요 전략 중 하나를 사용하여 수행 할 수 있습니다:
- 제한 희석 방법을 사용하는 모노클론 선택–4 개월부터 시작)-이 방법은 모노클론 선택에 대한 기존의 접근 방식이며 각 웰의 셀 밀도를 최소(이상적으로는 웰 당 하나의 셀)로 제한하기 위해 몇 차례의 희석 및 증폭이 필요합니다. 다른 방법 보다는 보다 적게 비싸,희석을 제한하는 것은 극단적으로 노동집약 시간 소모적일 수 있다 는 사실을 포함하여 중요한 결점이 있습니다. 더욱,희석에 의하여 우물 당 세포의 수를 제한하는 것은 단지 가장 생산적인 그들 이지 않을지도 모른 가장 풍부한 클론의 고립을 가능하게 할 것이다.
- 검증된 현장 판 시드(4 개월부터 시작)방법을 사용한 단일 클론 선택-단일 클론 선택에 대한 고급 접근법입니다. 그것은 기존의 접근 방식보다 노동 집약적이다;그러나,그것은 전문 장비의 사용을 필요로한다. 이 장비는 단일 셀을 96 또는 384 개의 웰 마이크로 플레이트에 자동으로 시드하도록 설계되었습니다. 전통적인 방법과는 달리,대부분의 단일 클론은 증폭되기 전에 격리되고 평가되어 연구자들이 가장 풍부한 후보가 아닐 수도있는 최고의 후보자를 선택할 수 있습니다.
낮은 수의 클론 증폭 사이클을 감안할 때,단일 클론 스크리닝 및 선택에 대한보다 빠르고 강력한 접근 방식을 허용합니다. 또한 5-6 개월에 시작되는 안정적인 세포주 생성을 몇 주 동안 성공적으로 줄일 수 있습니다.