Hei ihmiset! Voisiko joku kertoa, miten punasolujen hajoamispuskuri toimii? Mikä funktio ainesosilla on?
käytin tätä reseptiä:
1 l ddH20
8, 26 g ammoniumkloridia (NH4CL)
1 g kaliumbikarbonaattia (KHCO3)
0, 037 g EDTA
pH 7, 3
huhun mukaan sillä olisi jotain tekemistä Na + / K+Atpaasiaktiivisuuden kanssa, mutta tämä ei ole niin yksityiskohtaista kuin haluaisin tietää, miten se toimii.
haluaisin kovasti selityksen, miten tämä puskuri toimii, tai ehkä vihjeen siitä, mistä voin löytää litterature, tai vastaavaa, tästä.
Thanks!
Tulkaa! 80 katselua eikä yhtään vastausta! Onko kysymykseni epäselvä? Voisiko olla, että kukaan ei osaa tai ei tee mitään kehonhuoltoa auttaakseen kaveria ulos?Vain vihje siitä, mistä voisin lukea siitä olisi erittäin arvostettu samoin!
toinen vaihtoehto on, että monet näistä 80 post katsojat vietti jonkin aikaa tutkia tätä Sinulle (kuten minä, joka vietti yli tunnin Internetissä yrittää selvittää) ja ei löytänyt mitään yksityiskohtaisempaa kuin mitä jo tiedät……….
leelee on Pe marraskuu 12 07:43: 39 2010 sanoi:
sekin on kai mahdollista. Pyydän anteeksi teiltä kaikilta mukavilta ihmisiltä, jotka yrititte auttaa minua, ja kiitän myös ajastanne ja vaivannäöstänne!
anteeksi, että herätin henkiin tällaisen ja vanhan langan, mutta minuakin kiinnosti tietää vastaus. Toisella foorumilla joku käyttää Tris: ää kaliumin biokarbonaatin sijaan ja se toimi edelleen, joten en näe, miten se voisi olla Na + / K+ pumpuista
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
hyvä CTC,
katso alla oleva viittaus:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
tärkeä osa on: –
tislattuun veteen asetetut nisäkkäiden erytrosyytit
turpoavat, kunnes jossain kriittisessä vaiheessa nouseva
paine solun sisäosissa hukuttaa solukalvon vetolujuuden
ja hemoglobiini pakenee
(hemolyysi). Delano (1995) kehitti
– mallin ennustaakseen kriittisen joukon fysikaalisia olosuhteita
, jotka johtavat nisäkkäiden
erytrosyyttien osmoottiseen repeämään. Mallissa määritettiin, että
punasolujen kohtalo hypotonisessa liuoksessa riippuu
tonisuudesta, solun alkuperäisestä pallomaisuudesta,
sen tilavuuden alkuosasta, jossa ei ole
vettä, ja suurimmasta murto-osasta
, jonka pinta-alaa voidaan venyttää.
olemme käyttäneet lysis-puskuriasi (nh4cl) punasolujen poistamiseen Ficoll-Paque-eristyksestä kokoverestä. RBC: t ovat ei-toivottuja vieras kuten olemme jälkeen neutrofiilit, monosyytit, verihiutaleet jne. Käyttämällä tätä liukupuskuria nämä solut eivät aktivoidu millään tavalla pilaamaan Kokeitamme eli Neutrafiilien degranulaatiota ja kemotaksiaa.
toivon, että tämä antaa sinulle hieman enemmän ymmärrystä siitä, mitä on mukana RBC: n
Kindest regards
Uncle Rhombus
Hei!
olen viettänyt viimeiset tunnit etsien vastausta tähän kysymykseen ja ajattelin postata myöhempää käyttöä varten.
eri lähteet väittävät eri asioita. Tämä on pohjimmiltaan yhdistelmä siitä, mitä olen löytänyt…
jos lisäämme kokoveren puhtaaseen tislattuun veteen, kaikki solut lopulta murtuvat auki osmoottisen paineen vuoksi. Joten meidän täytyy muuttaa menettelyä, koska haluamme vain punasolujen lyseota.
NH4Cl: se saa RBC: n turpoamaan, koska NH3: n tunkeutuminen aiheuttaa transmembraanivaihdon Cl-ja OH-ionien välillä.
KHCO3: se lisää RBC: n turpoamisnopeutta ja voi toimia myös puskurikomponenttina.
EDTA: Se sitoutuu Mg+2: een ja Ca+2: een, mikä horjuttaa RBC: n kalvoa, mutta ei vaikuta valkosoluihin yhtä paljon, joten sen avulla voimme kohdistaa vain RBC: hen. On myös suola pesuaine, joka lopulta säädellä happamuutta ja osmolariteetti lysaatin,ja suojaa DNA: ta nukleaaseista (sitoutumalla ioneja, jotka toimivat kofaktorit näiden entsyymien).
pääasia oli luultavasti tehdä jonkinlainen puskuri, joka on turvallinen muille soluille, mutta hyödyntää RBC: n erityispiirteitä, niiden rajallista kykyä kestää osmoottista stressiä.
EDTA-lisäaineen Raeson saattaa olla myös pikemminkin repaleisista soluista vapautuvien hajoavien entsyymien esto kuin lyysin helpottaminen.
Hei,
joku herätys tähän vanhaan aiheeseen.. Tietääkö kukaan, miten pysäyttää solujen hajoaminen tällä puskurilla? Käytän ACK puskuri lyse RBCs jälkeen Ficoll eristäminen Pbmcs. Asia on, että jos ylitämme aikaa 5 minuuttia lysis, pbmcs kärsivät samoin ja minun täytyy lisätä trypan sininen ja juosta toiseen huoneeseen laskea soluja kautta TC20 kone. Niin, ihmettelen miten edustava on määrä, että saan jos ACK puskuri toimii vielä kunnes TC20 antaa minun tulos kahtena….?
kiitos etukäteen!
paras vaihtoehto olisi pestä Pbmc: t puskurissa ennen kuin aloitat laskemisen: pyöräytä solut alas, poista ACK-puskuri, korvaa PBS: llä tai vastaavalla ratkaisulla (esim. Ringer ’ s?), ota sitten määräosa laskemista varten.