Helló emberek! Arra gondoltam, hogy valaki meg tudná mondani, hogyan működik a vörösvérsejt-lízis puffer. Milyen funkciója van az összetevőknek?
ezt a receptet használtam:
1 l ddH20
8,26 g ammónium-klorid (NH4Cl)
1 g kálium-hidrogén-karbonát (KHCO3)
0,037 G EDTA
pH 7,3
a pletykák szerint köze van a Na+/K+ATPáz aktivitáshoz, de ez nem olyan részletes, mint szeretném tudni, hogyan működik.
nagyon örülnék egy magyarázatnak, hogy ez a puffer hogyan működik,vagy talán egy tipp, hogy hol találok alomokat, vagy hasonlókat.
köszönöm!
Gyerünk srácok! 80 megtekintés és egyetlen válasz sem! Nem világos a kérdésem? Lehet, hogy senki sem tudja, vagy nem törődik a testével, hogy segítsen egy fickónak?Csak egy tipp, hogy hol tudtam olvasni lenne nagyon nagy népszerűségnek örvend, valamint!
a másik lehetőség az, hogy ezek közül a 80 hozzászóló néző közül sokan egy kis időt töltöttek ezzel az Ön számára (mint én, aki több mint egy órát töltött az interneten, hogy megtudja), és nem talált semmi részletesebbet, mint amit már tud……….
leelee a péntek November 12 07:43: 39 2010 azt mondta:
Nos, ez is lehetséges, Azt hiszem. Elnézést kérek minden kedves embertől, akik megpróbáltak segíteni nekem, és köszönöm az időt és erőfeszítést!
sajnálom, hogy újraélesztettem egy ilyen régi szálat, de én is érdekelt a válasz ismerete. Egy másik fórumon valaki kálium-biokarbonát helyett Tris-t használ, és még mindig működött, így nem látom, hogy lehet Na+ / K + szivattyúkból
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
kedves CTC,
kérjük, olvassa el az alábbi hivatkozást:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
a fontos bit: –
a desztillált vízbe helyezett emlős eritrociták
megduzzadnak, amíg egy kritikus ponton a sejt belsejében emelkedő
nyomás meghaladja a sejtmembrán
szakítószilárdságát, és a hemoglobin
kiszabadul(hemolízis). Delano (1995) kifejlesztett egy
modellt a
fizikai állapotok kritikus halmazának előrejelzésére, amelyek az emlős
eritrociták ozmotikus repedését eredményezik. A modell megállapította,hogy az eritrocita
sorsa hipotóniás oldatban
függ a tonicitástól, a sejt kezdeti gömbösségétől,
térfogatának kezdeti frakciójától, amelyet nem foglal el
víz, és a maximális frakcionált mennyiség
– vel, amelyet a felület megnyújthat.
a lízis puffert (NH4CL) használjuk a vörösvértestek eltávolítására a teljes vér Ficoll-Paque izolációjából. Az RBC-k nem kívánt szennyező anyagok, mivel neutrofilek, monociták, vérlemezkék stb. Ennek a lízis puffernek a használatával ezek a sejtek semmilyen módon nem aktiválódnak, ami tönkretenné kísérleteinket, azaz a neutrofilek degranulációját és kemotaxisát.
remélem, ez ad némi megértést arról, hogy mi vesz részt az RBC hipotóniás lízisében
legkedvesebb üdvözlettel
rombusz bácsi
Szia!
töltöttem az elmúlt néhány órában keresi a választ erre a kérdésre, és gondoltam, tegye a jövőben is.
különböző források különböző dolgokat állítanak. Ez alapvetően annak a kombinációja, amit találtam…
ha a teljes vért tiszta desztillált vízhez adjuk, az ozmotikus nyomás miatt az összes sejt végül kinyílik. Tehát módosítanunk kell az eljárást, mert csak azt akarjuk, hogy a vörösvértestek lizálódjanak.
NH4Cl: az RBC megduzzad, mert az NH3 behatolása transzmembráncserét indukál a CL és az OH ionok között.
KHCO3: növeli a vörösvértestek duzzadásának sebességét, és pufferkomponensként is szolgálhat.
EDTA: Kötődik az Mg+2-hez és a Ca + 2-hez, ami destabilizálja a vörösvértest membránját, de nem hat annyira a fehérvérsejtekre, így lehetővé teszi számunkra, hogy csak a vörösvértestet célozzuk meg. Ez egy sós mosószer is, amely végül szabályozza a lizátum savasságát és ozmolaritását, és megvédi a DNS-t a nukleázoktól (azáltal, hogy kötődik az ezen enzimek kofaktoraként szolgáló ionokhoz).
a lényeg valószínűleg valamilyen puffer létrehozása volt, amely biztonságos más sejtek számára, de kihasználja a vörösvértestek sajátos jellemzőit, korlátozott képességét az ozmotikus stressz ellen.
Az EDTA addíció raeson-ja inkább a megrepedt sejtekből felszabaduló lebontó enzimek gátlása lehet, nem pedig a lízis elősegítése.
Helló,
ennek a régi témának néhány újjáéledése.. Tudja valaki, hogyan lehet megállítani a sejtek lízisét ezzel a pufferrel? Én használ ACK puffer lyse RBC után Ficoll izolálása Pbmc. A helyzet az, hogy ha túllépjük a lízis 5 percét, akkor a Pbmc-k is szenvednek, és hozzá kell adnom a trypan blue-t, és egy másik szobába kell futnom, hogy a cellákat a TC20 gépen keresztül számoljuk. Szóval, kíváncsi vagyok, mennyire reprezentatív az a szám, amit kapok, ha az ACK puffer még mindig működik, amíg a TC20 nem adja meg az eredményemet két példányban….?
előre is köszönöm!
a legjobb megoldás az lenne, ha a pbmc-ket pufferben mosná, mielőtt elkezdené számolni: centrifugálja le a cellákat, távolítsa el az ACK puffert, cserélje ki PBS-re vagy hasonló megoldásra (pl. Ringer?), majd vegyen egy alikvotot a számláláshoz.