Salut oameni! Mă întrebam dacă cineva ar putea să-mi spună cum funcționează tamponul de liză a celulelor roșii din sânge. Ce funcție au ingredientele?
am folosit această rețetă:
1 l ddH20
8,26 g clorură de amoniu (NH4Cl)
1 g bicarbonat de potasiu (KHCO3)
0,037 G EDTA
pH 7,3
zvonul spune că are ceva de-a face cu activitatea Na+/K+ATPază, dar acest lucru nu este atât de detaliat pe cât aș vrea să știu cum funcționează.
aș aprecia foarte mult o explicație cum funcționează acest tampon, sau poate un indiciu unde pot găsi litterature, sau altele asemenea, în acest sens.
Multumesc!
haideți, băieți! 80 vizualizări și nu un singur răspuns! Întrebarea mea este neclară? Ar putea fi faptul că nimeni nu știe sau nu orice grijă organism pentru a ajuta un tip afară?Doar un indiciu despre unde aș putea citi despre el ar fi foarte apreciat, de asemenea!
cealaltă opțiune este că mulți dintre acești 80 de spectatori de postări au petrecut ceva timp căutând acest lucru pentru dvs. (ca mine, care am petrecut peste o oră pe internet încercând să aflu) și nu am putut găsi nimic mai detaliat decât ceea ce știți deja……….
leelee pe vineri Noiembrie 12 07: 43: 39 2010 a spus:
Ei bine, care este, de asemenea, posibil, cred. Îmi cer scuze tuturor oamenilor drăguți care au încercat să mă ajute și, de asemenea, Vă mulțumesc pentru timpul și efortul depus!
Îmi pare rău că am reînviat un astfel de fir vechi, dar și eu am fost interesat să știu răspunsul. Pe un alt forum, cineva folosește Tris în loc de biocarbonat de potasiu și încă a funcționat, așa că nu văd cum ar putea fi de la pompele Na+ / K +
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
Stimate CTC,
vă rugăm să consultați referința de mai jos:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
bitul important este: –
eritrocitele mamiferelor plasate în apă distilată
se vor umfla până când, la un moment critic, presiunea în creștere
în interiorul celulei copleșește rezistența la tracțiune
a membranei celulare și hemoglobina scapă
(hemoliză). Delano (1995) a dezvoltat un model
pentru a prezice setul critic de condiții fizice
care au ca rezultat ruperea osmotică a eritrocitelor de mamifere
. Modelul a stabilit că
soarta eritrocitelor într-o soluție hipotonică depinde
de tonicitate, sfericitatea inițială a celulei,
fracția inițială a volumului său care nu este ocupată de
apă și cantitatea maximă fracționată de
care suprafața poate fi întinsă.
am folosit tamponul de liză (NH4CL) pentru a elimina celulele roșii din sânge din izolarea Ficoll-Paque a sângelui integral. RBC-urile sunt un contaminant nedorit, deoarece suntem după neutrofile, monocite, trombocite etc. Prin utilizarea acestui tampon de liză, aceste celule nu sunt activate în niciun fel pentru a distruge experimentele noastre, adică degranularea și chemotaxia Neutrafilelor.
sper că acest lucru vă oferă o înțelegere mai bună a ceea ce este implicat în Liza hipotonică a RBC ‘ s
kindest regards
Uncle Rhombus
bună!
am petrecut ultimele ore căutând un răspuns la această întrebare și m-am gândit să postez pentru referințe viitoare.
diferite surse pretind lucruri diferite. Aceasta este de fapt o combinație a ceea ce am găsit…
dacă adăugăm întregul sânge la apa distilată pură, toate celulele se vor deschide în cele din urmă din cauza presiunii osmotice. Așa că trebuie să modificăm procedura pentru că vrem doar ca celulele roșii din sânge să se lizeze.
NH4Cl: face ca RBC să se umfle, deoarece penetrarea NH3 induce un schimb transmembranar între ionii Cl și OH.
KHCO3: crește rata de umflare a RBC și poate servi și ca componentă tampon.
EDTA: Se leagă de Mg + 2 și Ca+2, care destabilizează membrana RBC, dar nu afectează la fel de mult celulele albe din sânge, deci ne permite să vizăm doar RBC. Este,de asemenea, un detergent de sare care va regla în cele din urmă aciditatea și osmolaritatea lizatului și ne protejează ADN-ul de nucleaze (prin legarea la ionii care servesc drept cofactori pentru aceste enzime).
principalul punct a fost probabil să facă un fel de tampon, care este sigur pentru alte celule, dar să exploateze caracteristicile specifice ale RBC-urilor, capacitatea lor limitată de a rezista stresului osmotic.
raeson pentru adăugarea EDTA poate fi, de asemenea, mai mult inhibarea enzimelor degradante eliberate din celulele rupte, mai degrabă decât pentru a ajuta la liză.
Bună ziua,
unele renaștere a acestui subiect vechi.. Știe cineva o modalitate de a opri liza celulelor prin acest tampon? Eu folosesc tampon ACK pentru a lyse RBC după izolarea Ficoll de PBMCs. Chestia este că, dacă depășim timpul de 5 minute pentru liză, Pbmc-urile suferă și trebuie să adaug albastru trypan și să alerg într-o altă cameră pentru a număra celulele prin intermediul mașinii TC20. Deci, mă întreb cât de reprezentativ este numărul pe care îl primesc dacă tamponul ACK acționează în continuare până când TC20 îmi dă rezultatul meu în duplicat….?
Vă mulțumim anticipat!
cel mai bun pariu ar fi să spălați Pbmc-urile într-un tampon înainte de a începe să numărați: rotiți celulele, îndepărtați tamponul ACK, înlocuiți cu PBS sau o soluție similară (de exemplu, Ringer?), apoi luați o alicotă pentru numărare.