Hej människor! Jag undrade om någon kunde berätta för mig hur den röda blodkroppsbufferten fungerar. Vilken funktion har ingredienserna?
jag använde detta recept:
1 l ddH20
8.26 g ammoniumklorid (NH4Cl)
1 g kaliumbikarbonat (KHCO3)
0.037 g EDTA
pH 7.3
ryktet säger att det har något att göra med Na+/K+ATPase-aktiviteten, men det här är inte så detaljerat som jag skulle vilja veta hur det fungerar.
jag skulle verkligen uppskatta en förklaring hur denna buffert fungerar, eller kanske en ledtråd till var jag kan hitta litteratur eller liknande på detta.
tack!
kom igen killar! 80 visningar och inte ett enda svar! Är min fråga oklar? Kan det vara så att ingen vet eller inte någon kroppsvård för att hjälpa en kille?Bara en ledtråd om var jag kunde läsa om det skulle också vara mycket uppskattat!
det andra alternativet är att många av dessa 80-postvisare spenderade lite tid på att titta på det här för dig (som jag själv, som tillbringade över en timme på internet och försökte ta reda på det) och kunde inte hitta något mer detaljerat än vad du redan vet……….
leelee på fre November 12 07:43: 39 2010 sade han:
Jo det är också möjligt antar jag. Jag ber om ursäkt till alla er trevliga människor som försökte hjälpa mig, och jag tackar dig också för din tid och ansträngning!
ledsen att återuppliva en sådan och gammal tråd, men jag var också intresserad av att veta svaret. På ett annat forum använder någon Tris istället för kaliumbikarbonat och det fungerade fortfarande, så jag ser inte hur det kan vara från Na + / K + pumpar
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
kära CTC,
hänvisa till referensen nedan:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
den viktiga biten är: –
däggdjurs erytrocyter placerade i destillerat vatten
kommer att svälla tills vid någon kritisk punkt stiger
trycket i cellens inre överväldigar draghållfastheten
hos cellmembranet och hemoglobin flyr
(hemolys). Delano (1995) utvecklade en
– modell för att förutsäga den kritiska uppsättningen fysiska förhållanden
som resulterar i osmotisk bristning av däggdjur
erytrocyter. Modellen bestämde att erytrocytens
öde i en hypotonisk lösning beror
på tonicitet, cellens initiala sfäricitet,
den initiala fraktionen av dess volym som inte upptas av
vatten och den maximala fraktionsmängden med
som ytan kan sträckas.
vi har använt din lysbuffert (NH4CL) för att ta bort röda blodkroppar från ficoll-Paque isolering av helblod. RBC: erna är en oönskad förorening som vi är efter neutrofiler, monocyter, blodplättar etc. Genom att använda denna lysbuffert aktiveras dessa celler inte på något sätt för att förstöra våra experiment, dvs degranulering och kemotaxi av neutrofiler.
jag hoppas att detta ger dig lite mer förståelse för vad som är involverat i hypotonisk lys av RBC: s
Kindest regards
Uncle Rhombus
Hej!
jag har spenderat de senaste timmarna på att leta efter ett svar på den här frågan och trodde att jag skulle posta för framtida referens.
olika källor hävdar olika saker. Detta är i grunden en kombination av vad jag har hittat…
om vi lägger hela blodet till rent destillerat vatten kommer alla celler så småningom att brista upp på grund av osmotiskt tryck. Så vi måste ändra proceduren eftersom vi bara vill att de röda blodkropparna ska lysa.
NH4Cl: det får RBC att svälla, eftersom penetration av NH3 inducerar ett transmembranutbyte mellan Cl och OH-joner.
KHCO3: det ökar graden av svullnad av RBC och kan också fungera som en buffertkomponent.
EDTA: Det binder till Mg + 2 och Ca+2, vilket destabiliserar RBC-membranet, men påverkar inte vita blodkroppar lika mycket, så det tillåter oss att bara rikta in sig på RBC. Är också ett saltvättmedel som så småningom kommer att reglera surheten och osmolariteten hos lysatet och skyddar vårt DNA från nukleaser (genom att binda till jonerna som fungerar som kofaktorer för dessa enzymer).
huvudpunkten var förmodligen att göra någon form av buffert, som är säker för andra celler, men utnyttja de specifika egenskaperna hos RBC, deras begränsade förmåga att motstå osmotisk stress.
raeson för EDTA-tillsats kan också vara mer inhibering av nedbrytande enzymer som frigörs från brustna celler, snarare än att hjälpa Lys.
Hej,
någon återupplivning av detta gamla ämne.. Vet någon ett sätt att stoppa lysen av cellerna med denna buffert? Jag använder ACK buffert för att lyse RBC efter Ficoll isolering av Pbmc. Saken är att om vi överskrider tiden på 5 minuter för Lys, lider Pbmc också och jag måste lägga till trypanblå och springa till ett annat rum för att räkna celler via tc20-maskin. Så jag undrar hur representativ är räkningen som jag får om ACK-bufferten fortfarande fungerar tills TC20 ger mitt resultat i duplikat….?
tack på förhand!
din bästa insats skulle vara att tvätta Pbmc i en buffert innan du börjar räkna: snurra ner cellerna, ta bort ACK-buffert, ersätt med PBS eller liknande lösning (t. ex. Ringer ’ s?), ta sedan en alikvot för att räkna.