hur lång tid tar det att producera monoklonala antikroppar?

monoklonala antikroppar kan produceras i många olika cellinjer på våra anläggningar. Men vi gynnar Kinesisk hamster äggstock (CHO) eller mänskliga embryonala njure (HEK) cellinjer på grund av deras robusta tillväxt och förmåga att utföra humanliknande glykosylering på Fc-domänen för monoklonala antikroppar.

vårt optimerade arbetsflöde och tidslinjer för monoklonal antikroppsproduktion kan beskrivas enligt följande:

1. Antikroppssekvensering när sekvenser ännu inte är tillgängliga (2-3 veckor för variabla regioner och leader-sekvenser; 3-4 veckor för fullängdssekvensen)
   1. från renade proteiner (masspektrabaserad sekvensering)
   2. från hybridomcellinjer (transkriptomisk baserad sekvensering)
2. val av adekvat uttrycksvektor, gensyntes och kloning av antikroppskodande gener-börjar vid 2-3 veckor
3. transfektion
   1. övergående uttryck för kortvariga projekt eller små / medelstora produktion (börjar vid 3-4 veckor)
   2. stabil cellinjegenerering för långsiktiga projekt, kommersiell och storskalig produktion (börjar vid 5 månader)
4. produktionsskalning och rening (ledtiderna är kvantitetsberoende)

övergående uttryck av monoklonala antikroppar är tillräckligt för de flesta tillämpningar. I dessa fall, beroende på de erforderliga avkastnings-och renhetsnivåerna, börjar transfektions -, Produktions -, reningsstegen (steg 4 och 5 i processen som visas ovan) från 3 till 4 veckor. Monoklonala antikroppar producerade genom övergående uttryck används i preliminära karakteriseringsstudier, forskningsprojekt och prekliniska tester.

däremot, när antikroppar är avsedda för terapeutiska tillämpningar eller för att användas som komponenter i in vitro-diagnostik och medicintekniska produkter, måste stabila cellinjer genereras. I dessa fall börjar transfektion, screening och subkloning vid 5-6 månader. De stora utmaningarna för varje stabil cellinjegenereringsprocess härrör från den arbetsintensiva och tidskrävande processen för monoklonval och stabilitetsbekräftelse.

i detalj, vid vektorns transfektion, erhålls stabila pooler (en blandning av flera kloner) och förstärks. Preliminär karakterisering av dessa pooler gör det möjligt för forskare att identifiera de med högsta och mest konsekventa produktionsavkastning. Därefter väljs högproduktiva pooler för monoklonisolering. Monokloner definieras som en specifik subpopulation härrörande från en enda cell, således delar monokloner samma genetiska bakgrund med stabilt integrerade vektorer och liknande produktionsutbyten.

att säkerställa ”klonalitet” kan vara särskilt utmanande när man arbetar med däggdjurscellinjer på grund av svårigheten att isolera enskilda celler. För närvarande kan monoklonisolering vid ProteoGenix utföras med hjälp av en av två huvudstrategier:

• Monoklonval med begränsande utspädningsmetod (börjar vid 4 månader) – denna metod är den konventionella metoden för monoklonval och det kräver flera omgångar utspädning och förstärkning för att begränsa celltätheten i varje brunn till ett minimum (helst en cell per brunn). Även om det är billigare än andra metoder, har begränsande utspädning viktiga nackdelar inklusive det faktum att det kan vara extremt arbetsintensivt och tidskrävande. Dessutom begränsar antalet celler per brunn genom utspädning endast isoleringen av de vanligaste klonerna – vilket kanske inte är de mest produktiva.
• Monoklonval med hjälp av Verified in Situ Plate Seeding (VIPS gastronomi) – metoden (börjar vid 4 månader) – VIPS-metoden är en avancerad metod för monoklonval. Det är mindre arbetsintensivt än det konventionella tillvägagångssättet, men det kräver användning av specialutrustning. VIPS-utrustningen har utformats för att automatiskt såda enskilda celler i 96 eller 384 brunnsmikroplattor. I motsats till den traditionella metoden isoleras och utvärderas de flesta enskilda kloner före förstärkning som gör det möjligt för forskare att välja de bästa kandidaterna – vilket kanske inte är de vanligaste.

med tanke på det lägre antalet klonförstärkningscykler möjliggör vips-metoden för en snabbare och mer robust metod för monoklonscreening och urval. Dessutom kan stabil cellinjegenerering, som börjar vid 5-6 månader, framgångsrikt minskas med flera veckor.