Hej folkens! Jeg spekulerede på, Om nogen kunne fortælle mig, hvordan lysis-bufferen med røde blodlegemer fungerer. Hvilken funktion har ingredienserne?
jeg brugte denne opskrift:
1 l ddH20
8.26 g ammoniumchlorid (NH4Cl)
1 g kaliumbicarbonat (KHCO3)
0.037 g EDTA
pH 7.3
rygtet siger, at det har noget at gøre med Na+/K+ATPase-aktiviteten, men dette er ikke så detaljeret, som jeg gerne vil vide, hvordan det fungerer.
jeg vil meget sætte pris på en forklaring på, hvordan denne buffer fungerer, eller måske et tip til, hvor jeg kan finde litteratur eller lignende på dette.
Tak!
kom nu gutter! 80 visninger og ikke et enkelt svar! Er mit spørgsmål uklart? Kan det være, at ingen kender eller ikke nogen kropspleje for at hjælpe en fyr ud?Bare et tip om, hvor jeg kunne læse om det, ville også være meget værdsat!
den anden mulighed er, at mange af disse 80 post-seere brugte lidt tid på at undersøge dette for dig (som mig selv, der tilbragte over en time på internettet og forsøgte at finde ud af det) og ikke kunne finde noget mere detaljeret end hvad du allerede ved……….
leelee den Fre Nov 12 07: 43: 39 2010 sagde han:
nå, det er også muligt, tror jeg. Jeg undskylder alle jer dejlige mennesker, der forsøgte at hjælpe mig, og jeg takker også for din tid og kræfter!
Undskyld at genoplive en sådan og gammel tråd, men jeg var også interesseret i at kende svaret. På et andet forum bruger nogen Tris i stedet for kaliumbiocarbonat, og det fungerede stadig, så jeg kan ikke se, hvordan det kunne være fra Na+/K+ pumper
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
kære CTC,
se nedenstående reference:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
den vigtige bit er: –
pattedyrs erythrocytter anbragt i destilleret vand
vil svulme op, indtil det stigende
Tryk i celleindretningen overvælder trækstyrken
styrken af cellemembranen og hæmoglobin undslipper
(hæmolyse). Delano (1995) udviklede en
model til at forudsige det kritiske sæt fysiske forhold
, der resulterer i osmotisk brud på pattedyr
erythrocytter. Modellen fastslog, at
erythrocytens skæbne i en hypotonisk opløsning afhænger
af tonicitet, den oprindelige sfæricitet af cellen,
den oprindelige fraktion af dens volumen ikke optaget af
vand og den maksimale fraktionsbeløb med
som overfladearealet kan strækkes.
vi har brugt din lysis buffer (NH4CL) til at fjerne røde blodlegemer fra Ficoll-Pake isolering af fuldblod. RBC ‘ erne er en uønsket forurening, som vi er efter neutrofiler, monocytter, blodplader osv. Ved at bruge denne lysisbuffer aktiveres disse celler ikke på nogen måde for at ødelægge vores eksperimenter, dvs.degranulering og kemotakse af Neutraphils.
jeg håber, at dette giver dig en mere forståelse af, hvad der er involveret i den hypotoniske lysis af RBC ‘ s
venligste hilsen
onkel Rhombus
Hej!
jeg har brugt de sidste par timer på at lede efter et svar på dette spørgsmål og tænkte, at jeg ville sende til fremtidig reference.
forskellige kilder hævder forskellige ting. Dette er dybest set en kombination af, hvad jeg har fundet…
hvis vi tilsætter fuldblod til rent destilleret vand, vil alle cellerne til sidst briste op på grund af osmotisk tryk. Så vi er nødt til at ændre proceduren, fordi vi kun ønsker, at de røde blodlegemer skal lyse.
NH4Cl: det får RBC til at svulme op, fordi penetration af NH3 inducerer en transmembranudveksling mellem Cl-og OH-ioner.
KHCO3: det øger hastigheden af hævelse af RBC og kan også tjene som en bufferkomponent.
EDTA: Det binder til Mg + 2 og Ca+2, som destabiliserer RBC-membranen, men påvirker ikke hvide blodlegemer så meget, så det giver os mulighed for kun at målrette mod RBC. Er også et saltopvaskemiddel,som i sidste ende regulerer lysatets surhed og osmolaritet og beskytter vores DNA mod nukleaser (ved at binde til de ioner, der tjener som cofaktorer for disse stoffer).
hovedpointen var sandsynligvis at lave en slags buffer, der er sikker for andre celler, men udnytte de specifikke egenskaber ved RBC ‘ er, deres begrænsede evne til at modstå osmotisk stress.
raeson til EDTA-tilsætning kan også være mere inhibering af nedbrydningssymboler frigivet fra brudte celler snarere end at hjælpe lysis.
Hej,
nogle genoplivning af dette gamle emne.. Kender nogen en måde at stoppe lysis af cellerne ved denne buffer? Jeg bruger ACK buffer til at lyse RBC ‘er efter Ficollisolering af Pbmc’ er. Sagen er, at hvis vi overskrider tiden på 5 minutter til lysis, lider Pbmc ‘ erne også, og jeg skal tilføje trypan blue og løbe til et andet rum for at tælle celler via TC20-maskine. Så jeg spekulerer på, hvor repræsentativt er det antal, jeg får, hvis ACK-bufferen stadig virker, indtil TC20 giver mit resultat i to eksemplarer….?
tak på forhånd!
dit bedste valg ville være at vaske Pbmc ‘ erne i en buffer, før du begynder at tælle: Spin ned cellerne, fjern ACK-buffer, udskift med PBS eller lignende løsning (f. eks. Ringers?), tag derefter en alikvot til tælling.