Hallo Leute! Ich habe mich gefragt, ob mir jemand sagen könnte, wie der Lysepuffer für rote Blutkörperchen funktioniert. Welche Funktion haben die Inhaltsstoffe?
Ich habe dieses Rezept verwendet:
1 l ddH20
8,26 g Ammoniumchlorid (NH4Cl)
1 g Kaliumbicarbonat (KHCO3)
0,037 g EDTA
pH 7,3
Das Gerücht besagt, dass es etwas mit der Na + / K + ATPase-Aktivität zu tun hat, aber das ist nicht so detailliert, wie ich gerne wissen würde, wie es funktioniert.
Ich würde mich sehr über eine Erklärung freuen, wie dieser Puffer funktioniert, oder vielleicht über einen Hinweis, wo ich dazu Literatur oder ähnliches finden kann.
Danke!
Kommt schon Leute! 80 ansichten und keine einzige Antwort! Ist meine Frage unklar? Könnte es sein, dass niemand weiß oder keine Körperpflege hat, um einem Kerl zu helfen?Nur ein Hinweis, wo ich darüber lesen könnte, wäre auch sehr dankbar!
Die andere Möglichkeit ist, dass viele dieser 80 Post-Zuschauer einige Zeit damit verbracht haben, dies für Sie zu untersuchen (wie ich, der über eine Stunde im Internet verbracht habe, um es herauszufinden) und nichts Detaillierteres finden konnten als das, was Sie bereits wissen……….
leelee am Fr Nov 12 07:43:39 2010 sagte:
Nun, das ist auch möglich, denke ich. Ich entschuldige mich bei allen netten Leuten, die versucht haben, mir zu helfen, und ich danke Ihnen auch für Ihre Zeit und Mühe!
Es tut mir leid, einen solchen und alten Thread wiederzubeleben, aber auch ich war daran interessiert, die Antwort zu kennen. In einem anderen Forum verwendete jemand Tris anstelle von Kaliumbiokarbonat und es funktionierte immer noch, daher sehe ich nicht, wie es von Na + / K + sein könnte.
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
Lieber CTC,
Bitte beachten sie die referenz unten:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
Das wichtige Bit ist: –
Säugetier-Erythrozyten, die in destilliertes Wasser
gegeben werden, quellen auf, bis an einem kritischen Punkt der steigende
Druck im Zellinneren die Zugfestigkeit
der Zellmembran überwältigt und Hämoglobin entweicht
(Hämolyse). Delano (1995) entwickelte ein
-Modell, um die kritischen physikalischen Bedingungen
vorherzusagen, die zu einem osmotischen Bruch der
-Erythrozyten von Säugetieren führen. Das Modell stellte fest, dass das
Schicksal des Erythrozyten in einer hypotonischen Lösung
von der Tonizität, der anfänglichen Sphärizität der Zelle,
dem anfänglichen Anteil ihres Volumens, der nicht von
Wasser besetzt ist, und der maximalen fraktionierten Menge abhängt, um die die Oberfläche gestreckt werden kann
.
Wir haben Ihren Lysepuffer (NH4CL) verwendet, um rote Blutkörperchen aus der Ficoll-Paque-Isolierung von Vollblut zu entfernen. Die Erythrozyten sind eine unerwünschte Verunreinigung, da wir nach Neutrophilen, Monozyten, Blutplättchen usw. sind. Durch die Verwendung dieses Lysepuffers werden diese Zellen in keiner Weise aktiviert, um unsere Experimente, dh Degranulation und Chemotaxis von Neutronen, zu ruinieren.
Ich hoffe, dies gibt Ihnen etwas mehr Verständnis dafür, was an der hypotonischen Lyse von RBC beteiligt ist
Mit freundlichen Grüßen
Onkel Rhombus
Hallo!
Ich habe die letzten Stunden damit verbracht, nach einer Antwort auf diese Frage zu suchen, und dachte, ich würde sie als zukünftige Referenz veröffentlichen.
Verschiedene Quellen behaupten verschiedene Dinge. Dies ist im Grunde eine Kombination von dem, was ich gefunden habe…
Wenn wir das Vollblut zu reinem destilliertem Wasser geben, platzen schließlich alle Zellen aufgrund des osmotischen Drucks auf. Also müssen wir das Verfahren ändern, weil wir nur wollen, dass die roten Blutkörperchen lysieren.
NH4Cl: Es lässt die Erythrozyten anschwellen, da das Eindringen von NH3 einen Transmembranaustausch zwischen Cl- und OH-Ionen induziert.
KHCO3: Es erhöht die Quellrate von Erythrozyten und kann auch als Pufferkomponente dienen.
EDTA: Es bindet an Mg + 2 und Ca + 2, was die Erythrozytenmembran destabilisiert, aber die weißen Blutkörperchen nicht so stark beeinflusst, so dass wir nur auf die Erythrozyten abzielen können. Ist auch ein Salzwaschmittel, das schließlich den Säuregehalt und die Osmolarität des Lysats reguliert und unsere DNA vor Nukleasen schützt (durch Bindung an die Ionen, die als Cofaktoren für diese Enzyme dienen).
Der Hauptpunkt war wahrscheinlich, eine Art Puffer herzustellen, der für andere Zellen sicher ist, aber die spezifischen Eigenschaften von Erythrozyten, ihre begrenzte Fähigkeit, osmotischem Stress standzuhalten, ausnutzt.
Die raeson für die EDTA-Zugabe kann auch eher die Hemmung von abbauenden Enzymen sein, die aus gerissenen Zellen freigesetzt werden, als die Lyse zu unterstützen.
Hallo,
eine Wiederbelebung dieses alten Themas.. Kennt jemand eine Möglichkeit, die Lyse der Zellen durch diesen Puffer zu stoppen? Ich benutze ACK-Puffer, um RBCs nach der Ficoll-Isolierung von PBMCs zu lysieren. Die Sache ist, dass, wenn wir die Zeit von 5 Minuten für die Lyse überschreiten, auch die PBMCs leiden und ich Trypanblau hinzufügen und in einen anderen Raum laufen muss, um Zellen über die TC20-Maschine zu zählen. Ich frage mich also, wie repräsentativ die Anzahl ist, die ich erhalte, wenn der ACK-Puffer noch wirkt, bis der TC20 mein Ergebnis doppelt ausgibt….?
Vielen Dank im Voraus!
Am besten waschen Sie die PBMCs in einem Puffer, bevor Sie mit dem Zählen beginnen: Drehen Sie die Zellen herunter, entfernen Sie den ACK-Puffer, ersetzen Sie sie durch PBS oder eine ähnliche Lösung (z. B. Ringer?), dann nehmen Sie ein Aliquot zum Zählen.