Los anticuerpos monoclonales se pueden producir en muchas líneas celulares diferentes en nuestras instalaciones. Pero favorecemos las líneas celulares de ovario de hámster chino (CHO) o riñón embrionario humano (HEK) debido a su robusto crecimiento y capacidad para realizar glicosilación similar a la humana en el dominio Fc de los anticuerpos monoclonales.
Nuestro flujo de trabajo optimizado y los plazos para la producción de anticuerpos monoclonales se pueden detallar de la siguiente manera:
- Secuenciación de anticuerpos cuando las secuencias aún no están disponibles (2-3 semanas para regiones variables y secuencias leader; 3-4 semanas para la secuencia completa)
- De proteínas purificadas (secuenciación basada en espectros de masa)
- De líneas celulares de hibridoma (secuenciación basada en transcriptómica)
- Elección del vector de expresión adecuado, síntesis génica y clonación de genes codificadores de anticuerpos, a partir de 2-3 semanas
- Transfección
- Expresión transitoria para proyectos a corto plazo o producción a pequeña/mediana escala (a partir de 3-4 semanas)
- Generación de líneas celulares estables para proyectos a largo plazo, producción comercial y a gran escala (a partir de 5 meses)
- Ampliación de la producción y purificación (los plazos de entrega dependen de la cantidad)
La expresión transitoria de anticuerpos monoclonales es suficiente para la mayoría de las aplicaciones. En estos casos, dependiendo del rendimiento y los niveles de pureza requeridos, las etapas de transfección, producción y purificación (pasos 4 y 5 en el proceso descrito anteriormente) comienzan a las 3 a 4 semanas. Los anticuerpos monoclonales producidos por expresión transitoria se utilizan en estudios preliminares de caracterización, proyectos de investigación y pruebas preclínicas.
En cambio, cuando los anticuerpos se destinen a aplicaciones terapéuticas o se utilicen como componentes de productos sanitarios y de diagnóstico in vitro, deben generarse líneas celulares estables. En estos casos, la transfección, los exámenes de detección y la subclonación comienzan a los 5-6 meses. Los principales desafíos de cualquier proceso de generación de líneas celulares estables se derivan del proceso de selección de monoclonas y confirmación de estabilidad, que requiere mucho tiempo y trabajo.
En detalle, tras la transfección del vector, se obtienen y amplifican piscinas estables (una mezcla de varios clones). La caracterización preliminar de estos grupos permite a los investigadores identificar aquellos con el rendimiento de producción más alto y consistente. Posteriormente, se seleccionan piscinas altamente productivas para el aislamiento monoclónico. Las monoclonas se definen como una subpoblación específica originada de una sola célula, por lo tanto, las monoclonas comparten el mismo fondo genético con vectores estables integrados y rendimientos de producción similares.
Garantizar la «clonalidad» puede ser particularmente difícil cuando se trabaja con líneas celulares de mamíferos debido a la dificultad para aislar células individuales. Actualmente, el aislamiento de monoclonas en ProteoGenix se puede realizar utilizando una de las dos estrategias principales:
- Selección de monoclonas utilizando el método de dilución limitante (a partir de los 4 meses): este método es el enfoque convencional para la selección de monoclonas y requiere varias rondas de dilución y amplificación para limitar la densidad celular en cada pocillo a un mínimo (idealmente una celda por pocillo). Aunque es menos costoso que otros métodos, limitar la dilución tiene inconvenientes importantes, incluido el hecho de que puede ser extremadamente laborioso y lento. Además, limitar el número de células por pocillo mediante dilución solo permitirá el aislamiento de los clones más abundantes, que podrían no ser los más productivos.
- Selección de monoclonos mediante el método de Siembra de Placas In Situ Verificadas (VIPS™) (a partir de los 4 meses): el método VIPS™ es un enfoque avanzado para la selección de monoclonos. Es menos laborioso que el enfoque convencional; sin embargo, requiere el uso de equipos especializados. El equipo VIPS™ fue diseñado para sembrar automáticamente células individuales en microplacas de 96 o 384 pocillos. En contraste con el método tradicional, la mayoría de los clones individuales se aíslan y evalúan antes de la amplificación, lo que permite a los investigadores elegir los mejores candidatos, que podrían no ser los más abundantes.
Dado el menor número de ciclos de amplificación de clones, el método VIPS™ permite un enfoque más rápido y robusto para el cribado y selección de monoclonos. Además, la generación de líneas celulares estables, que comienza a los 5-6 meses, se puede reducir con éxito en varias semanas.