Combien de temps faut-il pour produire des anticorps monoclonaux?

Des anticorps monoclonaux peuvent être produits dans de nombreuses lignées cellulaires différentes dans nos installations. Mais nous privilégions les lignées cellulaires de l’ovaire de hamster chinois (CHO) ou du rein embryonnaire humain (HEK) en raison de leur croissance robuste et de leur capacité à effectuer une glycosylation de type humain sur le domaine Fc des anticorps monoclonaux.

Notre flux de travail et nos délais optimisés pour la production d’anticorps monoclonaux peuvent être détaillés comme suit:

1. Séquençage des anticorps lorsque les séquences ne sont pas encore disponibles (2-3 semaines pour les régions variables et les séquences leaders; 3-4 semaines pour la séquence complète)
   1. À partir de protéines purifiées (séquençage à base de spectres de masse)
   2. À partir de lignées cellulaires d’hybridomes (séquençage à base de transcriptomes)
2. Choix du vecteur d’expression adéquat, de la synthèse de gènes et du clonage de gènes codant pour les anticorps – à partir de 2-3 semaines
3. Transfection
   1. Expression transitoire pour les projets à court terme ou la production à petite / moyenne échelle (à partir de 3-4 semaines)
   2. Génération stable de lignées cellulaires pour les projets à long terme, la production commerciale et à grande échelle (à partir de 5 mois)
4. Mise à l’échelle de la production et purification (les délais dépendent de la quantité)

L’expression transitoire des anticorps monoclonaux est suffisante pour la plupart des applications. Dans ces cas, en fonction des niveaux de rendement et de pureté requis, les étapes de transfection, de production, de purification (étapes 4 et 5 du procédé représenté ci-dessus) commencent à 3 à 4 semaines. Les anticorps monoclonaux produits par expression transitoire sont utilisés dans des études de caractérisation préliminaire, des projets de recherche et des tests précliniques.

En revanche, lorsque des anticorps sont destinés à des applications thérapeutiques ou à être utilisés comme composants de diagnostics et de dispositifs médicaux in vitro, des lignées cellulaires stables doivent être générées. Dans ces cas, la transfection, le dépistage et le sous-clonage commencent à 5-6 mois. Les principaux défis de tout processus de génération de lignées cellulaires stables découlent du processus exigeant en main-d’œuvre et en temps de sélection des monoclones et de confirmation de la stabilité.

En détail, lors de la transfection du vecteur, des pools stables (un mélange de plusieurs clones) sont obtenus et amplifiés. La caractérisation préliminaire de ces bassins permet aux chercheurs d’identifier ceux dont le rendement de production est le plus élevé et le plus constant. Par la suite, des piscines hautement productives sont sélectionnées pour l’isolation monoclone. Les monoclones sont définis comme une sous-population spécifique issue d’une seule cellule, de sorte que les monoclones partagent le même bagage génétique avec des vecteurs intégrés de manière stable et des rendements de production similaires.

Assurer la « clonalité » peut être particulièrement difficile lorsque l’on travaille avec des lignées cellulaires de mammifères en raison de la difficulté d’isoler des cellules individuelles. Actuellement, l’isolation monoclone chez ProteoGenix peut être réalisée en utilisant l’une des deux stratégies principales:

• Sélection de monoclones selon la méthode de dilution limite (à partir de 4 mois) – cette méthode est l’approche conventionnelle de la sélection de monoclones et nécessite plusieurs cycles de dilution et d’amplification pour limiter la densité cellulaire dans chaque puits au minimum (idéalement une cellule par puits). Bien que moins coûteuse que d’autres méthodes, la limitation de la dilution présente des inconvénients importants, notamment le fait qu’elle peut être extrêmement laborieuse et prendre beaucoup de temps. De plus, limiter le nombre de cellules par puits par dilution ne permettra que l’isolement des clones les plus abondants – qui pourraient ne pas être les plus productifs.
• Sélection de monoclones à l’aide de la méthode VIPS™ (Verified In-Situ Plate Seeding) (à partir de 4 mois) – la méthode VIPS™ est une approche avancée de la sélection de monoclones. Elle demande moins de main-d’œuvre que l’approche conventionnelle; cependant, elle nécessite l’utilisation d’équipements spécialisés. L’équipement VIPS™ a été conçu pour ensemencer automatiquement des cellules uniques en microplaques à 96 ou 384 puits. Contrairement à la méthode traditionnelle, la plupart des clones individuels sont isolés et évalués avant amplification, ce qui permet aux chercheurs de choisir les meilleurs candidats – qui pourraient ne pas être les plus abondants.

Compte tenu du nombre plus faible de cycles d’amplification de clones, la méthode VIPS™ permet une approche plus rapide et plus robuste du criblage et de la sélection des monoclones. De plus, la génération stable de lignées cellulaires, qui commence à 5-6 mois, peut être réduite avec succès de plusieurs semaines.