hoe lang duurt het om monoklonale antilichamen aan te maken?

monoklonale antilichamen kunnen in veel verschillende cellijnen in onze faciliteiten worden geproduceerd. Maar wij verkiezen Chinese hamsterovarium (CHO) of menselijke embryonale nier (HEK) cellijnen toe te schrijven aan hun robuuste groei en capaciteit om mens-als glycosylation op het Fc-domein van monoclonal antilichamen uit te voeren.

onze geoptimaliseerde workflow en tijdlijnen voor de productie van monoklonale antilichamen kunnen als volgt worden gedetailleerd:

1. Antilichaamsequencing wanneer sequenties nog niet beschikbaar zijn (2-3 weken voor variabele regio ‘ s en leader-sequenties; 3-4 weken voor de volledige lengte van de sequentie)
   1. Uit gezuiverde eiwitten (massa spectra gebaseerd sequencing)
   2. Van hybridoma-cellijnen (transcriptoom-gebaseerd sequencing)
2. de Keuze van de passende uitdrukking vector, gen synthese, en het klonen van antilichaam-codering van genen – vanaf 2-3 weken
3. Transfection
   1. Voorbijgaande uitdrukking voor kortlopende projecten of kleine/middelgrote productie (vanaf 3-4 weken)
   2. Stabiel cellijn generatie voor lange termijn projecten, commerciële en grootschalige productie (vanaf 5 maanden)
4. productie schaalvergroting en zuivering (doorlooptijden zijn afhankelijk van de hoeveelheid)

de voorbijgaande uitdrukking van monoclonal antilichamen is voldoende voor de meeste toepassingen. In deze gevallen, afhankelijk van de vereiste opbrengst en zuiverheidsniveaus, beginnen de transfectie, productie, zuiveringsstadia (stappen 4 en 5 in het hierboven afgebeelde proces) na 3 tot 4 weken. Monoclonal die antilichamen door voorbijgaande uitdrukking worden geproduceerd worden gebruikt in voorlopige karakteriseringsstudies, onderzoeksprojecten, en preclinical tests.

wanneer daarentegen antilichamen bestemd zijn voor therapeutische toepassingen of voor gebruik als componenten van in-vitrodiagnostica en medische hulpmiddelen, moeten stabiele cellijnen worden gegenereerd. In deze gevallen beginnen de transfectie, screening en subcloning bij 5-6 maanden. De belangrijkste uitdagingen van om het even welk stabiel de generatieproces van de cellijn vloeien uit het arbeidsintensieve en tijdrovende proces van monoclone selectie en stabiliteitsbevestiging af.

na transfectie van de vector worden stabiele pools (een mengsel van verschillende klonen) verkregen en versterkt. Voorlopige karakterisering van deze pools stelt onderzoekers in staat om degenen met de hoogste en meest consistente productieopbrengst te identificeren. Vervolgens worden zeer productieve zwembaden geselecteerd voor monoclone isolatie. Monoclones worden gedefinieerd als een specifieke subpopulatie afkomstig uit een enkele cel, dus monoclones delen dezelfde genetische achtergrond met stabiel geïntegreerde vectoren en vergelijkbare productieopbrengsten.

het waarborgen van” clonaliteit ” kan bijzonder moeilijk zijn bij het werken met zoogdiercellijnen vanwege de moeilijkheid om afzonderlijke cellen te isoleren. Momenteel, monoclone isolatie bij ProteoGenix kan worden uitgevoerd met behulp van een van twee belangrijke strategieën:

• Monoklonselectie met behulp van de beperkende verdunningsmethode (vanaf 4 maanden) – deze methode is de conventionele benadering van monoklonselectie en vereist verscheidene verdunnings-en amplificatieronden om de celdichtheid in elk putje tot een minimum te beperken (idealiter één cel per putje). Hoewel minder duur dan andere methoden, heeft het beperken van verdunning belangrijke nadelen, waaronder het feit dat het uiterst arbeidsintensief en tijdrovend kan zijn. Bovendien zal het beperken van het aantal cellen per put door verdunning alleen de isolatie van de meest voorkomende klonen mogelijk maken – die misschien niet de meest productieve zijn.
• Monoklonselectie met de methode Verified in Situ Plate Seeding (VIPS™) (vanaf 4 maanden) – de VIPs™ – methode is een geavanceerde benadering van monoklonselectie. Het is minder arbeidsintensief dan de conventionele aanpak; het vereist echter het gebruik van gespecialiseerde apparatuur. De VIPs ™ – apparatuur is ontworpen om automatisch afzonderlijke cellen in 96 of 384-wells microplaten te zaaien. In tegenstelling tot de traditionele methode, worden de meeste enkele klonen geà soleerd en vóór versterking geëvalueerd die onderzoekers toelaten om de beste kandidaten te kiezen – die misschien niet de meest overvloedige zijn.

gezien het lagere aantal kloon-amplificatiecycli, maakt de VIPs™ – methode een snellere en robuustere benadering van monokloon-screening en-selectie mogelijk. Bovendien kan de stabiele generatie van de cellijn, die bij 5-6 maanden begint, met succes door verscheidene weken worden verminderd.