Hallo mensen! Ik vroeg me af of iemand me kan vertellen hoe de rode bloedcel lysis buffer werkt. Welke functie hebben de ingrediënten?
ik gebruikte dit recept:
1 l ddH20
8,26 g ammoniumchloride (NH4Cl)
1 g kaliumbicarbonaat (KHCO3)
0,037 g EDTA
pH 7,3
het gerucht gaat dat het iets te maken heeft met de Na+/K+ATPase activiteit, maar dit is niet zo gedetailleerd als ik zou willen weten hoe het werkt.
ik zou het zeer op prijs stellen een uitleg te geven hoe deze buffer werkt, of misschien een hint te geven waar ik litteratuur kan vinden, of iets dergelijks.
bedankt!
Kom op jongens! 80 views en geen enkel antwoord! Is mijn vraag onduidelijk? Kan het zijn dat niemand weet of doet geen lichaam zorg om een man te helpen?Gewoon een hint over waar ik kon lezen over het zou zeer gewaardeerd worden ook!
de andere optie is dat veel van deze 80 post kijkers enige tijd op zoek naar dit voor u (zoals ikzelf, die meer dan een uur op het internet proberen uit te vinden) en kon niets meer gedetailleerd dan wat je al Weet vinden……….
leelee op VR Nov 12 07: 43: 39 2010 zei:
nou dat is ook mogelijk denk ik. Ik verontschuldig me aan jullie allemaal aardige mensen die me probeerden te helpen, en ik dank jullie ook voor jullie tijd en moeite!
Sorry om zo ‘ n oude draad te doen herleven, maar ook ik was geïnteresseerd in het weten van het antwoord. Op een ander forum, iemand Tris gebruiken in plaats van kalium biocarbonate en het werkte nog steeds, dus ik zie niet in hoe het zou kunnen worden van de Na+/K+ pompen
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
Lieve CTC,
zie de verwijzing hieronder:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
Het belangrijke stuk is:-
Zoogdieren erytrocyten geplaatst in gedestilleerd water
zal opzwellen tot ze op een kritisch punt van de stijgende
druk in de cel overdondert de treksterkte
sterkte van de celmembraan en hemoglobine ontsnapt
(hemolyse). Delano (1995) ontwikkelde een
model om de kritische reeks fysische condities
te voorspellen die resulteren in osmotische breuk van zoogdieren
erytrocyten. Het model bepaalde dat het lot van de erytrocyt in een hypotone oplossing
afhangt van de toniciteit, de initiële bolvorm van de cel,
het initiële deel van het volume dat niet wordt ingenomen door
water, en de maximale fractionele hoeveelheid met
die het oppervlak kan worden uitgerekt.
we hebben uw lysis buffer (NH4CL) gebruikt om rode bloedcellen te verwijderen uit de ficoll-Paque isolatie van volbloed. De RBC ‘ s zijn een ongewenste contaminant zoals wij na Neutrophils, Monocytes, bloedplaatjes enz.zijn. Door het gebruik van deze lysis-buffer worden deze cellen op geen enkele wijze geactiveerd om onze experimenten, d.w.z. degranulatie en chemotaxis van Neutrafielen, te ruïneren.
ik hoop dat dit u wat meer inzicht geeft in wat betrokken is bij de hypotone lysis van RBC ‘ s
vriendelijkste regards
Uncle Rhombus
Hoi!
ik heb de laatste uren besteed aan het zoeken naar een antwoord op deze vraag en dacht dat ik zou posten voor toekomstige referentie.
verschillende bronnen beweren verschillende dingen. Dit is eigenlijk een combinatie van wat ik heb gevonden…
als we het volbloed aan zuiver gedestilleerd water toevoegen, zullen alle cellen uiteindelijk door osmotische druk openbarsten. Dus moeten we de procedure aanpassen omdat we alleen de rode bloedcellen willen lyseren.
NH4Cl: het doet de RBC zwellen, omdat penetratie van NH3 een transmembraanuitwisseling tussen Cl en OH-ionen induceert.
KHCO3: het verhoogt de zwelling van RBC en kan ook dienen als buffercomponent.
EDTA: Het bindt aan Mg + 2 en Ca + 2, die het RBC-membraan destabiliseert, maar heeft geen effect op de witte bloedcellen zo veel, zodat het ons toestaat om alleen de RBC te richten. Is ook een zout detergent dat uiteindelijk de zuurgraad en osmolariteit van het lysaat zal reguleren, en ons DNA beschermt tegen nucleasen (door te binden aan de ionen die dienen als cofactoren voor deze enzymen).
het belangrijkste punt was waarschijnlijk om een soort buffer te maken, die voor andere cellen veilig is, maar de specifieke kenmerken van RBCs, hun beperkte capaciteit exploiteren om osmotische spanning te weerstaan.
de raeson voor EDTA-toevoeging kan ook meer de remming zijn van afbraakenzymen die vrijkomen uit gescheurde cellen, dan om lysis te helpen.
Hallo,
een herleving van dit oude onderwerp.. Weet iemand een manier om de lysis van de cellen te stoppen door deze buffer? Ik gebruik ACK buffer aan lyse RBCs na ficoll isolatie van PBMCs. Het ding is, dat als we de tijd van 5 minuten voor lysis overschrijden, de PBMC ‘ s ook lijden en ik moet trypan blue toevoegen en naar een andere kamer rennen om cellen te tellen via TC20 machine. Dus, ik vraag me af hoe representatief is de telling die ik krijg als de ACK buffer nog steeds werkt totdat de TC20 geeft mijn mijn resultaat in duplicaat….?
bij voorbaat dank!
uw beste kans zou zijn om de PBMC ’s in een buffer te wassen voordat u begint met tellen: draai de cellen naar beneden, verwijder ACK buffer, vervangen door PBS of soortgelijke oplossing (bijv. Ringer’ s?), neem dan een aliquot voor het tellen.