Monoklonale antistoffer kan produseres i mange forskjellige cellelinjer ved våre anlegg. Men vi favoriserer kinesisk hamster ovarie (CHO) eller Human embryonale nyre (HEK) cellelinjer på grunn av deres robuste vekst og evne til å utføre human-lignende glykosylering På Fc-domenet til monoklonale antistoffer.
vår optimaliserte arbeidsflyt og tidslinjer for monoklonale antistoffproduksjon kan beskrives som følger:
- Antistoffsekvensering når sekvenser ikke er tilgjengelige ennå (2-3 uker for variable regioner og ledersekvenser; 3-4 uker for hele sekvensen)
- fra rensede proteiner (massespektra basert sekvensering)
- fra hybridomcellelinjer (transkriptomisk basert sekvensering)
- Valg av adekvat uttrykksvektor, gensyntese og kloning av antistoffkodende gener-starter ved 2-3 uker
- Transfeksjon
- Transient uttrykk for kortsiktige prosjekter eller små/mellomstore produksjon (starter ved 3-4 uker)
- Stabil cellelinjegenerering for langsiktige prosjekter, kommersiell og storskala produksjon (starter ved 5 måneder)
- produksjonsskalering og rensing (ledetider er mengdeavhengige)
Forbigående ekspresjon av monoklonale antistoffer er tilstrekkelig for de fleste anvendelser. I disse tilfellene, avhengig av det nødvendige utbyttet og renhetsnivået, begynner transfeksjonen, produksjonen, rensingstrinnene (trinn 4 og 5 i prosessen som er avbildet ovenfor) på 3 til 4 uker. Monoklonale antistoffer produsert av forbigående uttrykk brukes i foreløpige karakterisering studier, forskningsprosjekter, og prekliniske tester.
derimot, når antistoffer er ment for terapeutiske applikasjoner eller skal brukes som komponenter i in vitro diagnostikk og medisinsk utstyr, må stabile cellelinjer genereres. I disse tilfellene begynner transfeksjonen, screeningen og subkloningen på 5-6 måneder. De store utfordringene i en stabil cellelinjegenereringsprosess stammer fra den arbeidsintensive og tidkrevende prosessen med monoklonvalg og stabilitetsbekreftelse.
i detalj, ved vektorens transfeksjon, oppnås stabile bassenger (en blanding av flere kloner) og forsterkes. Foreløpig karakterisering av disse bassengene gjør det mulig for forskere å identifisere de med høyest og mest konsistente produksjonsutbyttet. Deretter velges svært produktive bassenger for monoklonisolasjon. Monokloner er definert som en spesifikk subpopulasjon som stammer fra en enkelt celle, og dermed deler monokloner samme genetiske bakgrunn med stabilt integrerte vektorer og lignende produksjonsutbytter.
Å Sikre «klonalitet» Kan være spesielt utfordrende når man arbeider med pattedyrcellelinjer på grunn av vanskeligheten ved å isolere enkeltceller. For tiden kan monoklonisolasjon Ved ProteoGenix utføres ved hjelp av en av to hovedstrategier:
- Monoklonvalg ved hjelp av begrensende fortynningsmetode (starter ved 4 måneder) – denne metoden er den konvensjonelle tilnærmingen til monoklonvalg, og det krever flere runder med fortynning og forsterkning for å begrense celletettheten i hver brønn til et minimum (ideelt sett en celle per brønn). Selv om det er billigere enn andre metoder, har begrensende fortynning viktige ulemper, inkludert det faktum at det kan være ekstremt arbeidsintensivt og tidkrevende. Videre vil begrensning av antall celler per brønn ved fortynning bare muliggjøre isolering av de mest omfattende klonene – som kanskje ikke er de mest produktive.
- Monoklonvalg Ved Hjelp Av Den Verifiserte In-Situ Platesåingen (VIPS™) metoden – fra 4 måneder) – VIPS™ metoden er en avansert tilnærming til monoklonvalg. Det er mindre arbeidsintensivt enn den konvensjonelle tilnærmingen; det krever imidlertid bruk av spesialutstyr. VIPS™ utstyret ble designet for automatisk å så enkeltceller inn i 96 eller 384 brønnmikroplater. I motsetning til den tradisjonelle metoden, er de fleste enkeltkloner isolert og evaluert før forsterkning slik at forskere kan velge de beste kandidatene – som kanskje ikke er de mest tallrike.
GITT det lavere antall klonforsterkningssykluser, gir VIPS™ – metoden en raskere og mer robust tilnærming til monoklon screening og seleksjon. Videre kan stabil cellelinjegenerering, som starter ved 5-6 måneder, reduseres med flere uker.