Hei folkens! Jeg lurte på om noen kunne fortelle meg hvordan den røde blodcellelysebufferen fungerer. Hvilken funksjon har ingrediensene?
jeg brukte denne oppskriften:
1 l ddH20
8,26 g Ammoniumklorid (NH4Cl)
1 G Kaliumbikarbonat (KHCO3)
0,037 G EDTA
pH 7,3
ryktet har det at Det har Noe Å gjøre Med Na+/K+ATPase-aktiviteten, men dette er ikke så detaljert som jeg vil gjerne vite hvordan det fungerer.
jeg setter stor pris på en forklaring på hvordan denne bufferen fungerer, eller kanskje et hint om hvor jeg kan finne litteratur eller lignende på dette.
Takk!
Kom igjen folkens! 80 visninger og ikke et eneste svar! Er spørsmålet mitt uklart? Kan det være at ingen vet eller ikke noen kroppspleie for å hjelpe en fyr ut?Bare et hint om hvor jeg kunne lese om det ville være veldig mye verdsatt også!
det andre alternativet er at mange av disse 80 post-seerne brukte litt tid på å se på dette for deg (som meg selv, som brukte over en time på internett og prøvde å finne ut) og ikke kunne finne noe mer detaljert enn det du allerede vet……….
leelee På Fre November 12 07: 43: 39 2010 sa han:
Vel det er også mulig jeg antar. Jeg beklager til alle dere hyggelige mennesker som prøvde å hjelpe meg, og jeg takker også for din tid og innsats!
Beklager å gjenopplive en slik og gammel tråd, men jeg var også interessert i å vite svaret. På et annet forum bruker Noen Tris i stedet for kaliumbiokarbonat, og det virket fortsatt, så jeg ser ikke hvordan Det kan være Fra Na + / K + pumper
http://www.scienceforums.net/topic/13565-rbc-lysis/
Kjære CTC,
vennligst referer til referansen nedenfor:-
http://ir.library.oregonstate.edu/xmlui/bitstream/handle/1957/13985/Schreck.AnalysisSalmonidLeukocytes.pdf?sequence=3
Den viktige biten er:-
Pattedyr erytrocytter plassert i destillert vann
vil svulme til på et kritisk punkt øker
trykket i celleinteriøret overvelder strekk
styrken av cellemembranen og hemoglobin unnslipper
(hemolyse). Delano (1995) utviklet en
modell for å forutsi det kritiske settet av fysiske forhold
som resulterer i osmotisk ruptur av pattedyr
erytrocytter. Modellen bestemte at
skjebnen til erytrocyten i en hypotonisk løsning avhenger
på tonicitet, cellens første sfæriskitet,
den første fraksjonen av volumet ikke okkupert av
vann, og den maksimale fraksjonelle mengden av
som overflaten kan strekkes ut.
vi har brukt lysisbufferen (NH4CL) til å fjerne røde blodceller fra Ficoll-Paque isolering av fullblod. RBC er en uønsket forurensning som vi er Etter Nøytrofiler, Monocytter, Blodplater etc. Ved å bruke denne lysisbufferen aktiveres disse cellene ikke på noen måte for å ødelegge våre eksperimenter, dvs. degranulering og kjemotaksis Av Nøytrafiler.
jeg håper dette gir deg litt mer forståelse av hva som er involvert i HYPOTONISK lysis AV RBCS
Vennlig hilsen
Onkel Rhombus
Hei!
jeg har brukt de siste timene på å lete etter et svar på dette spørsmålet og tenkte jeg skulle legge inn for fremtidig referanse.
Ulike kilder hevder forskjellige ting. Dette er i utgangspunktet en kombinasjon av det jeg har funnet…
hvis vi tilsetter hele blodet til rent destillert vann, vil alle cellene til slutt briste åpne på grunn av osmotisk trykk. Så vi må endre prosedyren fordi vi bare vil at de røde blodcellene skal lyse.
NH4Cl: Det gjør RBC swell, fordi penetrasjon AV NH3 induserer en transmembran utveksling Mellom Cl og OH ioner.
KHCO3: det øker frekvensen av hevelse AV RBC og kan også tjene som en bufferkomponent.
EDTA: Det binder Seg Til Mg + 2 Og Ca + 2, som destabiliserer rbc-membranen, men påvirker ikke hvite blodlegemer så mye, så det tillater oss å bare målrette RBC. Er også et salt vaskemiddel som til slutt vil regulere surheten og osmolariteten til lysatet,og beskytter VÅRT DNA fra nukleaser (ved å binde til ioner som fungerer som kofaktorer for disse enzymene).
hovedpoenget var trolig å lage en slags buffer, som er trygt for andre celler, men utnytte de spesifikke egenskapene Til Rbc, deres begrensede evne til å motstå osmotisk stress.
raeson for EDTA tillegg kan også være mer hemming av nedbrytende enzymer frigjort fra sprukne celler, snarere enn å hjelpe lysis.
Hei,
noen gjenoppliving av dette gamle emnet.. Vet noen en måte å stoppe lysis av cellene ved denne bufferen? Jeg bruker ACK buffer til lyse RBCs etter Ficoll isolasjon Av PBMCs. Saken er at hvis Vi overskrider tiden på 5 minutter for lysis, lider Pbmcene også, og jeg må legge til trypanblå og løpe til et annet rom for å telle celler via TC20-maskin. Så, jeg lurer på hvor representativ er tellingen jeg får hvis ACK-bufferen fortsatt virker til TC20 gir mitt resultat i duplikat….?
Takk på forhånd!
Din beste innsats ville være å vaske Pbmc i en buffer før du begynner å telle: Spinn ned cellene, fjern ACK buffer, erstatt MED PBS eller lignende løsning (F. eks.), ta deretter en aliquot for telling.